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大腸菌群檢驗及注意事項

發(fā)布時間：

2019-12-02

大腸菌群介紹

大腸菌群并非細菌學分類命名，而是衛(wèi)生細菌領(lǐng)域的用語，它不代表某一個或某一屬細菌，而指的是具有某些特性的一組與糞便污染有關(guān)的細菌，這些細菌在生化及血清學方面并非完全一致，其定義為：需氧及兼性厭氧、在37℃能分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣的革蘭氏陰性無芽胞桿菌。一般認為該菌群細菌可包括大腸埃希氏菌、檸檬酸桿菌、產(chǎn)氣克雷白氏菌和陰溝腸桿菌等。

大腸菌群分布較廣，在溫血動物糞便和自然界廣泛存在。調(diào)查研究表明，大腸菌群細菌多存在于溫血動物糞便、人類經(jīng)?；顒拥膱鏊约坝屑S便污染的地方，人、畜糞便對外界環(huán)境的污染是大腸菌群在自然界存在的主要原因。糞便中多以典型大腸桿菌為主，而外界環(huán)境中則以大腸菌群其他型別較多。

大腸菌群是作為糞便污染指標菌提出來的，主要是以該菌群的檢出情況來表示食品中有否糞便污染。大腸菌群數(shù)的高低，表明了糞便污染的程度，也反映了對人體健康危害性的大小。糞便是人類腸道排泄物，其中有健康人糞便，也有腸道患者或帶菌者的糞便，所以糞便內(nèi)除一般正常細菌外，同時也會有一些腸道致病菌存在（如沙門氏菌、志賀氏菌等），因而食品中有糞便污染，則可以推測該食品中存在著腸道致病菌污染的可能性，潛伏著食物中毒和流行病的威脅，必須看作對人體健康具有潛在的危險性。

大腸菌群是評價食品衛(wèi)生質(zhì)量的重要指標之一，目前已被國內(nèi)外廣泛應(yīng)用于食品衛(wèi)生工作中。

大腸菌群檢驗方法

由于大腸菌群指的是具有某些特性的一組與糞便污染有關(guān)的細菌，即：需氧及兼性厭氧、在37℃能分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣的革蘭氏陰性無芽胞桿菌。因此大腸菌群的檢測一般都是按照它的定義進行。

目前國內(nèi)采用的食品大腸菌群檢測方法主要有國家食品藥品監(jiān)督管理總局發(fā)布的國家標準和國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局頒布的進出口行業(yè)標準。兩個標準方法在檢測程序上略有不同。但兩種方法都是采用推測、驗證兩大步驟。

推測試驗：樣品稀釋后，選擇三個稀釋度，每個稀釋度接種三管LST肉湯。36±1℃培養(yǎng)48±2h，觀察是否產(chǎn)氣。

證實試驗：將產(chǎn)氣管培養(yǎng)物接種煌綠乳糖膽鹽（BGLB）肉湯管中，36±1℃培養(yǎng)48±2h，觀察是否產(chǎn)氣。以BGLB產(chǎn)氣為陽性。查MPN表，報告每ml(g)樣品中大腸菌群的MPN值。

乳糖發(fā)酵試驗：樣品稀釋后，選擇三個稀釋度，每個稀釋度接種三管LST發(fā)酵管。36±1℃培養(yǎng)48±2h，觀察是否產(chǎn)氣。

證實試驗：挑取LST產(chǎn)氣的發(fā)酵管，接種BGLB發(fā)酵管36±1℃培養(yǎng)48±2h，觀察產(chǎn)氣情況。

報告：根據(jù)證實為大腸菌群陽性的管數(shù)，查MPN表，報告每ml（g）大腸菌群的MPN值。

具體操作參見GB4789.3、SN/T0169-2010《進出口食品中大腸菌群、糞大腸菌群和大腸桿菌檢測方法

貼心提醒，MPN采用統(tǒng)計學的方法，通過稀釋培養(yǎng)計數(shù)，經(jīng)一系列復雜的運算，估算出具有共同特性的一類微生物在食品中存在的概率。

1．MPN檢索表：

MPN 為最大可能數(shù)(Most Probable Number)的簡稱。這種方法，對樣品進行連續(xù)系列進行稀釋，加入培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，從規(guī)定的反應(yīng)呈陽性管數(shù)的出現(xiàn)率，用概率論來推算樣品中菌數(shù)最近似的數(shù)值。

MPN檢索表只給了三個稀釋度，如改用不同的稀釋度，則表內(nèi)數(shù)字應(yīng)相應(yīng)降低或增加10倍。注意國家標準和行業(yè)標準中所附MPN表所用稀釋度是不同的，而且結(jié)果報告單位也不相同。

2．抑菌劑：

大腸菌群檢驗中常用的抑菌劑有膽鹽、十二烷基硫酸鈉、洗衣粉、煌綠、龍膽紫、孔雀綠等。抑菌劑的主要作用是抑制其它雜菌，特別是革蘭氏陽性菌的生長。

標準中LST肉湯利用十二烷基硫酸鈉作為抑菌劑，BGLB肉湯利用煌綠和膽鹽作為抑菌劑。

抑菌劑雖可抑制樣品中的一些雜菌，而有利于大腸菌群細菌的生長和挑選，但對大腸菌群中的某些菌株有時也產(chǎn)生一些抑制作用。有些抑菌劑用量甚微，稱量時稍有誤差，即可對抑菌作用產(chǎn)生影響，因此抑菌劑的添加應(yīng)嚴格按照標準方法進行。

為保證實驗結(jié)果的可靠性，大腸菌群檢驗過程中又有哪些注意事項呢？

1：檢樣時注意無菌操作；

2：稀釋時采用的稀釋液可以用磷酸鹽緩沖液或生理鹽水，接種時可采用九管法，設(shè)置三個梯度，分別為0.1g/mL、0.01g/mL、0.001g/mL，每一個稀釋度的試管應(yīng)充分混勻；

3：每次實驗需要有陰性對照；

4：使用小倒管培養(yǎng)基配制時，為排凈氣泡，滅菌時不要把試管的蓋子蓋的太緊，滅菌后注意觀察一下倒管中的氣體是否排完全；

5：高壓滅菌后，等高壓滅菌鍋的壓力表達到0，取出培養(yǎng)基放到冰箱冷卻，效果會比較好；

6：在實際工作中，大腸菌群的產(chǎn)氣量不同，有時倒管中充滿氣體，有時倒管中只有非常少的氣體（類似小米粒的氣泡），這時可以輕輕搖晃試管，如有氣泡沿管壁快速上浮，應(yīng)考慮可能有氣體產(chǎn)生。