2023年8月06日經國家標準化管理委員會,國家市場監督管理總局批準發布GB/T 13093-2023 《飼料中細菌總數的測定》標準，代替實施17年之久的GB/T 13093-2006 《飼料中細菌總數的測定》 。新標準將于2024年3月1日起正式實施。
GB/T 13093-2023標準歷時3年，經過成立標準修改小組、搜集樣品、確定實驗方案、實驗驗證、意見征求、評審等，最終大功告成。
一、本標準與GB/T 13093-2006 相比，主要修訂內容見表1：
表1：主要修訂內容
二、主要修訂內容實驗分析綜述
（一）培養基的確定
國內外標準用于測定細菌總數的培養基是平板計數瓊脂培養基（PCA）和營
養瓊脂培養基（NA）兩種，我們對兩種培養基的成分進行了比較，見表2。
國內外測定細菌總數測定的培養溫度和培養時間，見表3。
表2 用于細菌總數測定的培養基
表3 國內外細菌總數測定用的培養基、培養溫度、培養時間
從表2 中可以看出，PCA 里的胰蛋白胨比NA 里的蛋白胨是更優質的“食物”，葡萄糖更適合細菌生長。平板計數瓊脂（PCA）生長的菌落不容易運動，不容易造成蔓延，無法計數的現象。
從表3 中可以看出，國內外除了我們現修訂的飼料標準和環保行業的兩個標準外，其余都是使用PCA 培養基。
兩種培養基相同條件下和不同條件下的比較，見表4～表5。
表4 NA 和PCA 培養基相同條件下的比較
表5 NA 和PCA 培養基不同條件下的比較
根據表4來看，在相同條件下使用NA和PCA培養基的實驗室結果，經過統計學的T檢驗分析，p=0.3917。根據這個結果可以得出結論，NA和PCA培養基之間的差異并不顯著。
根據表5來看，在不同條件下使用NA和PCA培養基的實驗結果，經過統計學的T檢驗分析，p=0.9296，根據這個結果可以得出結論，NA和PCA培養基之間的差異并不顯著。
從以上結果可以看出，不管是方法相同和不同，差異都不顯著（p>0.05），特別是不同的檢測方法，差異更不顯著（p=0.9296）。同時,在重復幾百次試驗后，PCA 培養基上細菌生長會更好，因平板計數瓊脂（PCA）生長的菌落不容易運動，不容易造成蔓延，無法計數的現象。
再者說，GB 4789.2-2022《食品微生物學檢驗菌落總數的測定》、
ISO 4833-2013 《Microbiology of the food chain — Horizontal method for theenumeration of microorganisms》的檢測方法，以及AOAC、FDA、AS 等方法和國內進出口檢驗的方法，都是使用PCA 培養基。
所以，根據實驗結果，以及參考其它行業國家標準，最終培養基修改為平板計數瓊脂培養基（PCA），與國內外接軌。
（二）培養溫度的確定
23 個不同種類樣品的30℃和36℃培養溫度進行實驗比較，見表6
表6 PCA 培養基30℃和36℃
實驗結果從表6中可以看出， PCA 培養基用30℃和36℃ 分別培養48 小時，70%的結果基本相同或高于30℃的結果；相對標準偏差RSD 在0%～2.5%之間；對兩組數據進行了統計學的T 檢驗分析，p=0.1552，兩者之間差異不顯著；微生物細菌的生長溫度也是36℃最為適宜；
同時GB 4789.2-2022《食品微生物學檢驗菌落總數的測定》，用36℃培養更加反應樣品的菌落情況。考慮到大部分細菌（益生菌）都是用36℃溫度培養，省去了檢測單位培養箱的單獨設置和檢定。因此，本標準的培養溫度也定為36℃。
（三）培養時間的確定
23 個不同種類的樣品的培養時間的比較，見表7。
表7 PCA 培養基36℃，48h 和72h 比較
兩個培養時間的結果基本相同，對兩組數據進行了統計學的T 檢驗分析，
p=0.7806，兩者之間差異不顯著。同時GB 4789.2-2022《食品微生物學檢驗菌落總數的測定》和進出口食品、AOAC 和FDA，都是36℃，培養48 h，
并考慮到時長和簡便性。因此，本標準的培養時間也定為48 h。
（四）細菌總數的計算公式
原標準的計算公式是兩個稀釋度進行比較，若比值小于2取平均數，若大于2取稀釋倍數低的?，F依據統計學的原理，計算公式中增加了修正因子，國際標準和食品標準，更加合理和準確，并對不同含量和不同稀釋度可能出現的結果給出了實例，便于操作者使用。
細菌總數的報告，增加了修約的描述，以及空白試驗的要求。使操作者一目了然，更加合理，并規范了文本。
具體修改如下：
1.若只有一個稀釋度平板上的細菌數在適宜計數范圍內，計算兩個平板細菌數的平均值，再將平均值乘以相應稀釋倍數，作為每g（mL）樣品中細菌總數結果。
上述數據按9.2.2數字修約后,表示為16000或1.6×104。
2.若有兩個連續稀釋度的平板細菌數在適宜計數范圍內時，按下列公式計算：
3.若所有稀釋度的平板上細菌數均大于300 CFU，則對稀釋度最高的平板進行計數，其他平板可記錄為多不可計，結果按平均細菌數乘以最高稀釋倍數計算。
4.若所有稀釋度的平板細菌數均小于30 CFU，則應按稀釋度最低的平均細菌數乘以稀釋倍數計算。
5.若所有稀釋度(包括液體樣品原液)平板均無細菌生長，則以小于1乘以最低稀釋倍數計算。
6.若所有稀釋度的平板細菌數均不在30 CFU～300 CFU之間，其中一部分小于30 CFU或大于300 CFU時，則以最接近30 CFU或300 CFU的平均細菌數乘以稀釋倍數計算。
